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Katze.NEIN.:CMXR-000002
Produktname:ChomiX®-Magbeads Protease-resistentes Streptavidin (prSA) beschichtete Magnetkügelchen
Mit Protease-resistentem Streptavidin (prSA) beschichtete Magnetkügelchen von ChomiX®-Magbeads bestehen aus chemisch modifiziertem Streptavidin, bei dem Lysin- und Argininreste chemisch versiegelt sind.Diese Modifikation hat keinen Einfluss auf die Bindung der Perlen an biotinylierte Proteine und verhindert gleichzeitig den enzymatischen Abbau durch Trypsin- und LysC-Proteasen.In massenspektrometrisch basierten Proteomikstudien werden Trypsin- und LysC-Proteasen häufig zur Proteinverdauung verwendet.Um Probenverluste zu vermeiden, führen Forscher den enzymatischen Aufschluss direkt auf den Kügelchen in Streptavidin-Magnetkügelchensystemen durch, die mit biotinylierten Proteinen beladen sind.
Dieser enzymatische Verdauungsprozess erzeugt jedoch auch eine große Menge an Streptavidin-abgeleiteten Peptiden, die den Nachweis von Peptiden mit geringer Häufigkeit in der anschließenden massenspektrometrischen Analyse erheblich beeinträchtigen.
Daher kann die Entwicklung von ChomiX®-Magbeads mit Protease-resistentem Streptavidin (prSA) beschichteten Magnetkügelchen diese Störung erheblich reduzieren, was sich hervorragend für die direkte enzymatische Verdauung von biotinylierten Proteinen eignet, die auf Magnetkügelchen geladen sind, und in großem Umfang in der chemischen Proteomik und eingesetzt werden kann Protein-Protein-Interaktionsexperimente in Zellen wie APEX und BioID.
Die Perlen haben eine Konzentration von 10 mg/ml und eine Partikelgröße von 1,0 μm, mit hoher Streptavidin-Beladungskapazität (ca. 50 μg/1 mg) und extrem hoher Hydrophilie.Ihre superparamagnetischen Eigenschaften garantieren eine schnelle magnetische Reaktion.Sie verfügen außerdem über eine hervorragende Redispersionsstabilität und magnetische Stabilität und gewährleisten so effektiv eine hohe Proteinbindungsrate, eine geringe unspezifische Adsorption, Reaktionsgleichmäßigkeit und Nachweiskonsistenz.
Die Magnetkügelchen werden zur Anreicherung und Extraktion biotinylierter Proteine aus dem Proteom verwendet, gefolgt von einem direkten Aufschluss auf den Kügelchen und einer Identifizierung mittels hochauflösender Massenspektrometrie.Im Vergleich zu den herkömmlichen Streptavidin-Beads (wtS) weisen die proteaseresistenten Streptavidin-Beads (prS)-Proben eine kaum nachweisbare Menge an Streptavidin-abgeleiteten Peptiden in den Proben auf (Abbildung 1).
Bei Anwendung in BioID-Experimenten zur Identifizierung von SEC61B-interagierenden Proteinen in HeLa-Zellen kann prS 362 Proteine identifizieren, wobei die gesamte Proteinsignalintensität etwa zehnmal höher ist als die von wtS (Abbildung 2).Die Daten stammen aus der Literatur (Molecular Systems Biology, 2020).
Abbildung 1: Basispeakchromatogramme der Peptide in Proben nach Anreicherung mit wtS (links) oder prS (rechts).
Die entsprechenden Intensitäten der drei repräsentativen Peptide (m/z = 603,3.655,3.1018,0), die aus On-Bead-verdautem Streptavidin erzeugt wurden, sind im unteren Feld (XIC) dargestellt.
Abbildung 2: Anzahl und Intensität der mit SEC61B interagierenden Proteine, identifiziert durch herkömmliches Streptavidin wtS und prS.
1. Vor dem ersten Gebrauch gründlich vortexen und gut mischen, um eine Veränderung der Konzentration der Magnetkügelchen zu verhindern.Vermeiden Sie längeren Ultraschall, um Schäden an der Oberfläche der Magnetperlen zu vermeiden.
2. Die Aufbewahrungslösung für Kügelchen enthält geringe Konzentrationen kleiner antimikrobieller Moleküle. Führen Sie vor der Verwendung eine magnetische Trennung durch und waschen Sie sie 2-3 Mal mit reinem Wasser oder Pufferlösung.Verwenden Sie die Perlen so schnell wie möglich, um eine lange Lagerung zu vermeiden.
3. Bei 4℃ lagern und während des Gebrauchs ein Einfrieren und Auftauen vermeiden.
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