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Identifizierung der Protein-Protein-Wechselwirkung in lebenden Zellen: Proximity Labeling
Technische Plattform
Bei der TurboID-Technologieplattform wird eine mutierte Biotin-Ligase an den C-Terminus eines Zielproteins fusioniert. In überexprimierten Zellen biotinyliert die Zugabe von Biotin interagierende Proteine schnell innerhalb von 10 Minuten, selbst bei Raumtemperatur, mit minimalem Hintergrundrauschen. Aufgrund dieser Vielseitigkeit eignet sich TurboID für eine Vielzahl biologischer Systeme, darunter Säugetierzellen, Pflanzen und Insekten. Anschließend werden mit Biotin markierte Proteine isoliert, angereichert und verdaut, um Peptidproben für die Massenspektrometrie herzustellen, die eine detaillierte Analyse der Proteininteraktionen und -funktionen ermöglichen.
Unsere Vorteile
01.Hohe katalytische Effizienz
02. Schädigt lebende Zellen nicht
03.Hohe Effizienz und Stabilität der Biotinylierung
04.Effektive Biotinylierung bei Raumtemperatur (25°C)
Unser Service
| Projekt | Identifizierung von Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken in Zellen |
| Probe | Zelllysat, lebende Zellen |
| Hardwareplattform | Berührungsloser Ultraschall-Zellpulverisierer, ChemiDoc MP-Bildgebungssystem, Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 Massenspektrometer |
| Projektdauer | 4-6 Wochen |
| Leistungen | Projektbericht (einschließlich experimenteller Verfahren, Datenanalysediagramme, Ergebnisse der bioinformatischen Analyse) |
| Preis | Klicken Sie hier, um sich zu beraten |
Fallstudie
Projektziel:Analysieren Sie Veränderungen im Proteininteraktom des Zielproteins (POI) in Zellen vor und nach einer medikamentösen Behandlung.
Lösung:Nutzen Sie eine Proximity-Labeling-Strategie, indem Sie einen POI-TurboID-Expressionsvektor konstruieren, ihn in Zellen überexprimieren und medikamentenbehandelte Gruppen und Kontrollgruppen für die Biotinylierung einrichten. Bereichern Sie das Protein-Interaktom in Zellen, gefolgt von einer qualitativen und quantitativen Analyse der Unterschiede in biotinylierten Proteinen, um Veränderungen im POI-Interaktom zu charakterisieren.
Datenvisualisierung:
