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Les perles magnétiques à revêtement d'azide ChomiX®-Magbeads sont conçues en attachant de manière covalente un groupe bioorthogonal d'azide à la surface des billes magnétiques.Grâce respectivement au groupe de ligature non clivable (Figure A) et au groupe de ligature clivable (Figure B), ces billes peuvent être appliquées à l'enrichissement de macromolécules modifiées par des alcynes, notamment des protéines, des acides nucléiques, des anticorps et des sucres.Sur streptavidine (SA)coatedmmagnétiquebeads,Les billes magnétiques à revêtement d'azide ChomiX®-Magbeads présentent les avantages suivants :
1. Grâce à la réaction efficace de « chimie clic », les macromolécules modifiées par un alcyne peuvent être directement liées de manière covalente aux billes magnétiques, contrairement à l'interaction non covalente et réversible entre la streptavidine et la biotine.Par conséquent, le produit présente un taux de récupération plus élevé et une meilleure répétabilité.
2. Comme il n’y a pas de protéine à la surface des billes magnétiques, la contamination peptidique de fond due à la digestion enzymatique ne sera pas introduite.De plus, ces billes réduisent l’adsorption non spécifique pour rendre les échantillons plus propres, contribuant ainsi à améliorer l’efficacité de l’identification des protéines en faible abondance.
3. Les billes magnétiques modifiées chimiquement et moléculairement sont stables, ce qui les rend plus faciles à transporter et à stocker.
4. Les billes magnétiques d'azoture clivables permettent la libération douce (à l'aide d'acide formique) des peptides modifiés par la sonde chimique, ce qui est bénéfique pour l'identification ultérieure par spectrométrie de masse.
5. Le produit est rentable et améliore l’efficacité expérimentale car il évite le temps d’enrichissement en streptavidine-biotine.
Graphique A : Bille magnétique recouverte d'azide, groupe de liaison non clivable
GraphiqueB: AzidePerle magnétique enduite, groupe clivable
Par conséquent, le développement de billes azido-magnétiques ChomiX®-Magbeads peut grandement améliorer l’efficacité de l’enrichissement et de la séparation des macromolécules modifiées par un alcyne marquées bioorthogonalement, simplifiant ainsi le flux expérimental.En particulier, l'introduction de groupes de liaison clivables, qui peuvent libérer efficacement la protéine ou les peptides cibles, facilite la quantification des protéines ou l'identification de sites modifiés chimiquement par une sonde.Une étude connexe a été publiée dans Journal of Proteome Research (J Proteome Res. 2023,3360-3367), une revue faisant autorité dans le domaine de la protéomique.Les billes ont une concentration de 10 mg/ml et une taille de particule de 1,0 μm, avec une capacité de chargement d'azide élevée (30-50 nmol/1 mg) et une hydrophilie exceptionnelle.De plus, ils possèdent des propriétés superparamagnétiques garantissant une réponse magnétique rapide.Leur excellente stabilité de redispersion et leur stabilité magnétique garantissent efficacement un taux de liaison aux protéines élevé, une faible adsorption non spécifique, une uniformité de réaction et une cohérence de détection.
En 2023, le professeur Wang Chu de l'Université de Pékin, scientifique en chef de ChomiX, a publié avec son groupe un schéma d'expérimentation de protéomique chimique efficace et concis dans le Journal of Proteome Research.Ce schéma utilise des billes magnétiques d'azoture clivables pour réduire considérablement le temps d'analyse du groupe peptidique de cystéine marqué avec une sonde chimique (figure 1).De plus, la figure 2 présente évidemment une grande amélioration du taux d’identification des peptides modifiés.Par rapport aux billes magnétiques de streptavidine conventionnelles, les billes magnétiques d'azoture présentent des performances supérieures en termes de coût, de temps et d'efficacité, devenant ainsi un outil puissant dans la recherche sur les protéines, en particulier en protéomique chimique.
Figure 1 : En combinaison avec des billes magnétiques recouvertes d'azoture avec un groupe clivable, la durée expérimentale du superTOP-ABPP peut être réduite à 9 heures.
Figure 2 : Lorsqu'ils sont combinés avec des billes magnétiques recouvertes d'azoture avec un groupe clivable, plus de 10 000 peptides de cystéine peuvent être identifiés dans les mêmes conditions.
1. Avant la première utilisation, vortexer complètement et bien mélanger pour éviter de modifier la concentration des billes magnétiques.Évitez les ultrasons prolongés pour éviter d’endommager la surface des billes magnétiques.
2. La solution de stockage des billes contient 20 % d'éthanol.Avant utilisation, effectuez une séparation magnétique et un lavage 2 à 3 fois avec de l'eau pure ou une solution tampon.Utilisez les perles dès que possible pour éviter un stockage prolongé ;
3. Conserver à 4 ℃ et éviter le gel-dégel pendant l'utilisation.
4. Clivable Billes magnétiques d'azidedevraitbe tenu à l'écart desubstances acides pendant le stockage et l’utilisation.
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