Plateforme technique
La chimioprotéomique a fait progresser la découverte de cibles médicamenteuses, en particulier grâce aux plates-formes basées sur des sondes chimiques. Cependant, des défis tels que la synthèse complexe, le faible rendement, le coût élevé et le DAS inconnu des molécules médicamenteuses entravent les progrès.
La plateforme de billes magnétiques de photoaffinité résout ces problèmes en immobilisant les molécules actives de médicaments sur des billes magnétiques fonctionnelles via un éclairage UV, éliminant ainsi le besoin de conception de sondes chimiques. Cela garantit une liaison spécifique entre le médicament et sa protéine cible. Après incubation avec le protéome, les billes enrichissent et isolent les protéines cibles du médicament, qui sont ensuite analysées par immunoblot et spectrométrie de masse.
Fonctionnalités de la plateforme
Étude de cas
Pour valider les cibles de la staurosporine (Stau), nous l'avons immobilisée sur la surface de billes magnétiques fonctionnelles modifiées par photoaffinité (Stau-beads). Par la suite, nous avons incubé les perles Stau avec l’ensemble du protéome, en utilisant les perles Fmoc comme groupe témoin. Les résultats du Western blot (WB) résultants sont présentés dans la figure ci-dessous, indiquant que les perles de Stau ont efficacement enrichi la protéine cible FECH (une cible positive connue).
Ensuite, nous avons soumis les protéines enrichies et séparées à l’aide de billes Fmoc et de billes Stau à une digestion enzymatique et à une analyse par spectrométrie de masse. Nous avons comparé quantitativement les différences d'intensité des protéines entre le groupe expérimental (perles Stau) et le groupe témoin (perles Fmoc). Les résultats ont démontré que toutes les protéines cibles positives connues étaient significativement enrichies dans le groupe Stau-beads, confirmant l’efficacité de la méthode.
