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Le perle magnetiche rivestite di azide ChomiX®-Magbeads sono progettate attaccando in modo covalente un gruppo bioortogonale di azide alla superficie delle perle magnetiche.Attraverso rispettivamente il gruppo di legatura non scindibile (Figura A) e il gruppo di legatura scindibile (Figura B), queste sfere possono essere applicate all'arricchimento di macromolecole modificate con alchini, tra cui proteine, acidi nucleici, anticorpi e zuccheri.Sopra straeptavidina (SA)catatommagneticobead,Le perle magnetiche rivestite con azide ChomiX®-Magbeads presentano i seguenti vantaggi:
1. Attraverso l'efficiente reazione "click chemistry", le macromolecole modificate con alchino possono essere legate direttamente in modo covalente alle sfere magnetiche, a differenza dell'interazione non covalente e reversibile tra streptavidina e biotina.Pertanto, il prodotto ha un tasso di recupero più elevato e una migliore ripetibilità.
2. Poiché non sono presenti proteine sulla superficie delle biglie magnetiche, non verrà introdotta la contaminazione peptidica di fondo dovuta alla digestione enzimatica.Inoltre, queste sfere riducono l'adsorbimento non specifico per rendere i campioni più puliti, contribuendo a migliorare l'efficienza di identificazione delle proteine a bassa abbondanza.
3. Le perle magnetiche modificate molecolari chimiche sono stabili, rendendole più facili da trasportare e conservare.
4. Le sfere magnetiche di azide scindibili consentono il rilascio delicato (utilizzando acido formico) dei peptidi modificati dalla sonda chimica, il che è vantaggioso per la successiva identificazione tramite spettrometria di massa.
5. Il prodotto è conveniente e migliora l'efficienza sperimentale poiché evita il tempo di arricchimento con streptavidina-biotina.
Grafico A: Perlina magnetica rivestita con azide, gruppo di collegamento non scindibile
GraficoB: AzidePerlina magnetica rivestita, gruppo scindibile
Pertanto, lo sviluppo delle sfere azidomagnetiche ChomiX®-Magbeads può migliorare notevolmente l'efficienza dell'arricchimento e della separazione di macromolecole modificate con alchini marcate bioortogonalmente, semplificando così il flusso sperimentale.In particolare, l'introduzione di gruppi linker scindibili, che possono rilasciare in modo efficiente la proteina o i peptidi bersaglio, facilita la quantificazione delle proteine o l'identificazione di siti modificati chimicamente dalla sonda.Uno studio correlato è stato pubblicato sul Journal of Proteome Research (J Proteome Res. 2023,3360-3367), una rivista autorevole nel campo della proteomica.Le sfere hanno una concentrazione di 10 mg/ml e una dimensione delle particelle di 1,0 μm, con un'elevata capacità di carico dell'azide (30-50 nmol/1 mg) ed un'eccezionale idrofilia.Inoltre, possiedono proprietà superparamagnetiche che garantiscono una rapida risposta magnetica.La loro eccellente stabilità alla ridispersione e stabilità magnetica garantiscono efficacemente un elevato tasso di legame proteico, un basso adsorbimento non specifico, uniformità di reazione e coerenza di rilevamento.
Nel 2023, il professor Wang Chu dell'Università di Pechino, il capo scienziato di ChomiX, ha pubblicato con il suo gruppo uno schema di esperimenti di proteomica chimica efficiente e conciso sul Journal of Proteome Research.Questo schema utilizza sfere magnetiche di azide scindibili per ridurre significativamente il tempo di analisi per il gruppo peptidico di cisteina marcato con sonda chimica (figura 1).Inoltre, la Figura 2 mostra ovviamente un grande miglioramento nel tasso di identificazione dei peptidi modificati.Rispetto alle sfere magnetiche convenzionali di streptavidina, le sfere magnetiche di azide mostrano prestazioni superiori in termini di costi, tempo ed efficienza, essendo diventate un potente strumento nella ricerca sulle proteine, in particolare nella proteomica chimica.
Figura 1: In combinazione con sfere magnetiche rivestite di azide con gruppo scindibile, il tempo sperimentale di superTOP-ABPP può essere ridotto a 9 ore
Figura 2: Se combinati con sfere magnetiche rivestite di azide con gruppo scindibile, è possibile identificare più di 10.000 peptidi di cisteina nelle stesse condizioni
1. Prima del primo utilizzo, vortexare completamente e mescolare bene per evitare di modificare la concentrazione delle sfere magnetiche.Evitare gli ultrasuoni prolungati per evitare danni alla superficie delle sfere magnetiche.
2. La soluzione di conservazione delle sfere contiene il 20% di etanolo.Prima dell'uso, eseguire la separazione magnetica e lavare 2-3 volte con acqua pura o soluzione tampone.Utilizzare le perle il prima possibile per evitare una lunga conservazione;
3. Conservare a 4°C ed evitare il congelamento e lo scongelamento durante l'uso.
4. Scindibile Perline magnetiche di azideDovrebbebe tenuto lontano dasostanze acide durante lo stoccaggio e l'uso.
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