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ChomiX®-Magbeads Sfere magnetiche rivestite con streptavidina resistente alla proteasi (prSA)
Gatto.NO.:CMXR-000002
nome del prodotto：ChomiX®-Magbeads Sfere magnetiche rivestite con streptavidina resistente alla proteasi (prSA)
introduzione al prodotto
Le perle magnetiche rivestite con streptavidina resistente alla proteasi (prSA) ChomiX®-Magbeads sono progettate con streptavidina modificata chimicamente, dove i residui di lisina e arginina sono sigillati chimicamente.Questa modifica non influisce sul legame delle sfere con le proteine biotinilate, prevenendo al contempo la degradazione enzimatica da parte delle proteasi Trypsin e LysC.Negli studi di proteomica basati sulla spettrometria di massa, le proteasi Trypsin e LysC vengono spesso utilizzate per la digestione delle proteine.Per evitare la perdita del campione, i ricercatori eseguono direttamente la digestione enzimatica sulle sfere in sistemi di sfere magnetiche di streptavidina caricati con proteine biotinilate.
Tuttavia, questo processo di digestione enzimatica genera anche una grande quantità di peptidi derivati dalla streptavidina, che interferiscono seriamente con il rilevamento di peptidi a bassa abbondanza nelle successive analisi di spettrometria di massa.
Pertanto, lo sviluppo di sfere magnetiche rivestite con streptavidina resistente alla proteasi (prSA) ChomiX®-Magbeads può ridurre notevolmente questa interferenza, che è altamente adatta per la digestione enzimatica diretta di proteine biotinilate caricate su sfere magnetiche e può essere ampiamente utilizzata nella proteomica chimica e esperimenti di interazione proteina-proteina in cellule come APEX e BioID.
Le sfere hanno una concentrazione di 10 mg/ml e una dimensione delle particelle di 1,0 μ m, con un'elevata capacità di caricamento della streptavidina (circa 50 μ g / 1 mg) e un'idrofilicità estremamente elevata.Le loro proprietà superparamagnetiche garantiscono una rapida risposta magnetica.Possiedono inoltre un'eccellente stabilità di ridispersione e stabilità magnetica, garantendo efficacemente un elevato tasso di legame proteico, basso adsorbimento non specifico, uniformità di reazione e coerenza di rilevamento.
Caso di letteratura
Le sfere magnetiche vengono utilizzate per arricchire ed estrarre le proteine biotinilate dal proteoma, seguite dalla digestione diretta sulle sfere e dall'identificazione mediante spettrometria di massa ad alta risoluzione.Rispetto alle sfere di streptavidina convenzionali (wtS), i campioni di sfere di streptavidina resistenti alla proteasi (prS) mostrano una quantità appena rilevabile di peptidi derivati dalla streptavidina nei campioni (Figura 1).
Quando applicato negli esperimenti BioID per identificare le proteine interagenti con SEC61B nelle cellule HeLa, prS può identificare 362 proteine, con un'intensità complessiva del segnale proteico circa 10 volte superiore a wtS (Figura 2).I dati provengono dalla letteratura (Molecular Systems Biology, 2020).
Figura 1: Cromatogrammi dei picchi di base dei peptidi nei campioni dopo l'arricchimento di wtS (a sinistra) o prS (a destra).
Le intensità corrispondenti dei tre peptidi rappresentativi (m / z = 603,3,655,3,1018,0) generati dalla streptavidina digerita su microsfere sono mostrate nel pannello inferiore (XIC).
Figura 2: Numero e intensità delle proteine interagenti con SEC61B identificate dalla streptavidina convenzionale wtS e prS.
Nota
1. Prima del primo utilizzo, vortexare completamente e mescolare bene per evitare di modificare la concentrazione delle sfere magnetiche.Evitare gli ultrasuoni prolungati per evitare danni alla superficie delle sfere magnetiche.
2. La soluzione di conservazione delle sfere contiene basse concentrazioni di piccole molecole antimicrobiche. Prima dell'uso, eseguire la separazione magnetica e lavare 2-3 volte con acqua pura o una soluzione tampone.Utilizzare le perle il prima possibile per evitare una lunga conservazione.
3. Conservare a 4°C ed evitare il congelamento e lo scongelamento durante l'uso.
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