Comprendere la struttura e le interazioni delle proteine è essenziale per scoprire le loro funzioni biologiche. A causa della complessità del proteoma, nessuna singola tecnica può rivelare completamente questi aspetti. I biologi utilizzano spesso una combinazione di metodi, tra cui la spettrometria di massa con reticolazione (XL-MS) che si distingue per i suoi vantaggi unici.
XL-MS fornisce informazioni precise sulla distanza spaziale tra i residui di amminoacidi e offre numerosi vantaggi: requisiti minimi di campione, basse esigenze ambientali, nessuna limitazione di peso molecolare, reticolazione in situ, facilità d'uso e ampia produzione di dati.
La tecnologia XL-MS di ChomiX utilizza vari reticolanti chimici per colpire specifici residui di amminoacidi, reticolando e analizzando con precisione le interazioni proteina-proteina e anticorpo-antigene.
I comuni reticolanti chimici (come mostrato nella figura seguente) possono reticolare in modo covalente specifici residui di amminoacidi quando aggiunti ai sistemi proteici. Dopo la digestione enzimatica, vengono generati peptidi reticolati, che rappresentano le regioni di interazione tra le proteine. Attraverso l'identificazione tramite spettrometria di massa e l'analisi precisa delle sequenze peptidiche, è possibile ottenere informazioni sulle regioni di interazione.
Reticolante ammino-tiolo BS3
Reticolante ammino-solfidrilico EMCS
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5. Attrezzature all'avanguardia: dotati di spettrometri di massa avanzati come Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 e Bruker timsTOF, facilitiamo la ricerca innovativa.
Progetto | Identificazione delle regioni di interazione per le interazioni proteina-proteina e anticorpo-antigene |
Campione | Proteina pura, complesso anticorpo-antigene |
Piattaforma hardware | Polverizzatore di cellule ad ultrasuoni senza contatto, sistema di imaging ChemiDoc MP, spettrometro di massa Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 |
Durata del progetto | 2-4 settimane |
Risultati finali | Rapporto di progetto (comprese procedure sperimentali, grafici di analisi dei dati, risultati di analisi bioinformatica) |
Prezzo | Clicca per consultare |
In questo caso, la proteina sierica della BSA è stata reticolata utilizzando il reticolante reattivo con ammina BS3 per costruire una struttura dimerica della proteina sierica della BSA. L'analisi mediante spettrometria di massa della struttura dimerica ha identificato segmenti peptidici reticolati che corrispondevano ai dati della letteratura esistente, convalidando così l'accuratezza e l'affidabilità dell'esperimento.
I peptidi reticolati effettivamente rilevati sono coerenti con i peptidi reticolati presentati nella seguente letteratura:Caratterizzazione del dispiegamento proteico mediante spettrometria di massa a reticolazione rapida utilizzando reticolanti di-orto-ftalaldeide. Comunicazioni sulla natura, 13(1), 1468.