La piattaforma tecnologica TurboID prevede la fusione di una biotina ligasi mutata al C-terminale di una proteina bersaglio. Nelle cellule sovraespresse, l'aggiunta di biotina biotinila rapidamente le proteine interagenti entro 10 minuti, anche a temperatura ambiente, con un rumore di fondo minimo. Questa versatilità rende TurboID adatto a un'ampia gamma di sistemi biologici, comprese cellule di mammiferi, piante e insetti. Le proteine marcate con biotina vengono quindi isolate, arricchite e digerite per produrre campioni di peptidi per la spettrometria di massa, consentendo l'analisi dettagliata delle interazioni e delle funzioni delle proteine.
01.Alta efficienza catalitica
02.Non danneggia le cellule viventi
03. Elevata efficienza e stabilità della biotinilazione
04.Biotinilazione efficace a temperatura ambiente (25°C)
Progetto | Identificazione delle reti di interazione proteina-proteina nelle cellule |
Campione | Lisato cellulare, cellule vive |
Piattaforma hardware | Polverizzatore di cellule ad ultrasuoni senza contatto, sistema di imaging ChemiDoc MP, spettrometro di massa Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 |
Durata del progetto | 4-6 settimane |
Risultati finali | Rapporto di progetto (comprese procedure sperimentali, grafici di analisi dei dati, risultati di analisi bioinformatica) |
Prezzo | Clicca per consultare |
Scopo del progetto:Analizzare i cambiamenti nell'interattoma proteico della proteina bersaglio (POI) nelle cellule prima e dopo il trattamento farmacologico.
Soluzione:Utilizzare una strategia di etichettatura di prossimità costruendo un vettore di espressione POI-TurboID, sovraesprimendolo nelle cellule e creando gruppi trattati con farmaci e di controllo per la biotinilazione. Arricchire l'interattoma proteico nelle cellule, seguito da un'analisi qualitativa e quantitativa delle differenze nelle proteine biotinilate per caratterizzare i cambiamenti nell'interattoma POI.
Visualizzazione dei dati: