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製品

ChomiX®-Magbeads プロテアーゼ耐性ストレプトアビジン (prSA) コーティング磁気ビーズ

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商品名:ChomiX®-Magbeads プロテアーゼ耐性ストレプトアビジン (prSA) コーティング磁性ビーズ

製品導入

ChomiX®-Magbeads プロテアーゼ耐性ストレプトアビジン (prSA) コーティング磁気ビーズは、化学的に修飾されたストレプトアビジンを使用して設計されており、リジンおよびアルギニン残基が化学的に封止されています。この修飾は、トリプシンおよび LysC プロテアーゼによる酵素分解を防止しながら、ビオチン化タンパク質に結合するビーズには影響を与えません。質量分析ベースのプロテオミクス研究では、タンパク質の消化にトリプシンおよび LysC プロテアーゼがよく使用されます。サンプルの損失を避けるために、研究者はビオチン化タンパク質をロードしたストレプトアビジン磁気ビーズシステムでビーズ上で酵素消化を直接実行します。

ただし、この酵素消化プロセスでは大量のストレプトアビジン由来のペプチドも生成され、その後の質量分析における少量のペプチドの検出が著しく妨げられます。

したがって、ChomiX®-Magbeads プロテアーゼ耐性ストレプトアビジン (prSA) コーティング磁気ビーズの開発により、この干渉を大幅に軽減できます。これは、磁気ビーズにロードされたビオチン化タンパク質の直接酵素消化に非常に適しており、化学プロテオミクスや化学プロテオミクスで広く使用できます。 APEX や BioID などの細胞内でのタンパク質間相互作用実験。

ビーズの濃度は 10 mg/ml、粒子サイズは 1.0 μm で、高いストレプトアビジン担持容量 (約 50 μ g/1 mg ) と非常に高い親水性を備えています。その超常磁性特性により、迅速な磁気応答が保証されます。また、優れた再分散安定性と磁気安定性を備えており、高いタンパク質結合率、低い非特異的吸着、反応の均一性、検出の一貫性を効果的に確保します。

文学事件

磁気ビーズを使用して、プロテオームからビオチン化タンパク質を濃縮および抽出し、続いてビーズ上で直接消化し、高分解能質量分析法によって同定します。従来のストレプトアビジン ビーズ (wtS) と比較して、プロテアーゼ耐性ストレプトアビジン ビーズ (prS) サンプルでは、​​サンプル中にかろうじて検出できる量のストレプトアビジン由来ペプチドが示されています (図 1)。

HeLa 細胞内の SEC61B 相互作用タンパク質を同定する BioID 実験に適用すると、prS は 362 個のタンパク質を同定でき、全体のタンパク質シグナル強度は wtS の約 10 倍になります (図 2)。データの出典は文献 (Molecular Systems Biology、2020) です。

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図 1: wtS (左) または prS (右) の濃縮後のサンプル中のペプチドのベース ピーク クロマトグラム。

ビーズ上で消化されたストレプトアビジンから生成された 3 つの代表的なペプチド (m/z = 603.3、655.3、1018.0) の対応する強度を下のパネル (XIC) に示します。

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図 2: 従来のストレプトアビジン wtS および prS によって同定された SEC61B 相互作用タンパク質の数と強度。

注記

1. 初めて使用する前に、磁性ビーズの濃度が変化しないように十分にボルテックスしてよく混合してください。磁気ビーズの表面への損傷を防ぐため、長時間の超音波を避けてください。
 
2. ビーズ保存液には低濃度の低分子抗菌剤が含まれております。使用前に磁気分離を行い、純水または緩衝液で 2 ~ 3 回洗浄してください。長期保管を避けるため、ビーズはできるだけ早く使用してください。
 
3. 4℃で保管し、使用中の凍結融解は避けてください。

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