技術プラットフォーム
ケモプロテオミクスは、特に化学プローブベースのプラットフォームを使用して、創薬標的の発見を進歩させました。しかし、複雑な合成、低収率、高コスト、薬物分子の未知の SAR などの課題が進歩を妨げています。
光親和性磁気ビーズ プラットフォームは、UV 照射によって活性薬剤分子を機能性磁気ビーズに固定化し、化学プローブの設計を不要にすることでこれらの問題に対処します。これにより、薬物とその標的タンパク質間の特異的結合が確実になります。プロテオームとのインキュベーション後、ビーズは薬物標的タンパク質を濃縮して単離し、免疫ブロッティングおよび質量分析によって分析されます。
プラットフォームの機能
ケーススタディ
スタウロスポリン (Stau) の標的を検証するために、光親和性修飾機能性磁気ビーズ (Stau-beads) の表面にスタウロスポリンを固定化しました。続いて、対照群として Fmoc ビーズを使用して、Stau ビーズをプロテオーム全体とインキュベートしました。得られたウェスタンブロット (WB) の結果を以下の図に示します。これは、Stau ビーズが標的タンパク質 FECH (既知の陽性標的) を効果的に濃縮したことを示しています。
次に、Fmoc ビーズと Stau ビーズを使用して濃縮および分離したタンパク質を酵素消化および質量分析に供しました。実験グループ (Stau ビーズ) と対照グループ (Fmoc ビーズ) の間のタンパク質の強度の違いを定量的に比較しました。結果は、すべての既知の陽性標的タンパク質が Stau-beads グループで大幅に濃縮されていることを実証し、この方法の有効性を確認しました。
