Cysteïne post-translationele modificaties Omics-analyse

Cysteïne speelt met zijn opmerkelijke reactiviteit een cruciale rol in de eiwitstructuur en -functie. Het dient als nucleofiel reagens, redox-katalytisch centrum, metaalionligand en sleutelplaats voor conformationele veranderingen en neemt op grote schaal deel aan en beïnvloedt de eiwitactiviteit en regulerende mechanismen diepgaand. Het is vermeldenswaard dat cysteïneresiduen vatbaar zijn voor verschillende soorten post-translationele modificaties (PTM's), die niet alleen de functionele eigenschappen van eiwitten nauwkeurig afstemmen, maar ook tot functionele beperkingen kunnen leiden. Gezien de nauwe associatie van dergelijke modificaties met talrijke belangrijke ziekten bij de mens, is kwalitatieve en kwantitatieve analyse van cysteïne-PTM's in eiwitten van het allergrootste belang. Dit is van onmisbare waarde voor een diepgaand begrip van de biologische functies van relevante eiwitten en hun werkingsmechanismen bij gezondheids- en ziektetoestanden.

Chomix heeft een rijke ervaring in de identificatie van cysteïnemodificaties, zoals cysteïnepersulfidatie. Door op innovatieve wijze gebruik te maken van universele cysteïneprobes op basis van het verschil in pKa tussen -SH en -SSH, passen we de pH aan om achtergrondinterferentie van -SH te verminderen, waardoor de probes voornamelijk -SSH kunnen labelen en zo sulfenylatieplaatsen effectief kunnen identificeren.

Chomix beschikt over geavanceerde massaspectrometrietechnologie die in staat is om verschillende soorten post-translationele modificaties van eiwitten en hun specifieke locaties direct en nauwkeurig op te lossen. Door slimme integratie van scheidings- en verrijkingstechnieken met isotopenlabeling en andere geavanceerde methoden, maken we grootschalige, high-throughput kwalitatieve en kwantitatieve analyse van verschillende modificaties mogelijk, waardoor robuuste technische ondersteuning wordt geboden voor diepgaand onderzoek naar post-translationele modificaties van eiwitten.

Onze voordelen

1. Professionele expertise: Met ruime ervaring en publicaties in toonaangevende tijdschriften bieden wij dienstverlening op maat voor optimaal resultaat.

2. Rigoureus kwaliteitsmanagement: onze volwassen kwaliteitssystemen voldoen aan de ISO9001-normen en garanderen betrouwbare rapporten.

3. Uitgebreide service: van sondeontwerp tot bio-informatica-analyse, wij bieden alles-in-één advies tot levering, met tijdige voortgangsupdates.

4. Geavanceerde apparatuur: Uitgerust met geavanceerde massaspectrometers zoals Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 en Bruker timsTOF ondersteunen we baanbrekend onderzoek.

Onze service

Project	Cysteïne post-translationele modificaties Omics-analyse
Steekproef	Zuiver eiwit, cellysaat, levende cellen, ziek weefsel, bloed, bacteriën, plantenweefsel
Hardwareplatform	Contactloze ultrasone celvergruizer, ChemiDoc MP Imaging System, Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 massaspectrometer
Projectduur	4-8 weken
Leveringen	Projectrapport (inclusief experimentele procedures, data-analysegrafieken, bio-informatica-analyseresultaten)
Prijs	Klik om te raadplegen

Casestudy

Thiolering verwijst naar de koppeling van een thiolgroep (-SSH) aan cysteïneresiduen in eiwitten, gemedieerd door waterstofsulfide (H2S). Om dit proces verder te onderzoeken, kunnen hele proteomen worden geëxtraheerd uit cel- of weefselmonsters en worden gelabeld met behulp van een chemische sondemethode (cysteïne-specifieke sonde). In tegenstelling tot thiolinterferentie maakt deze methode een effectieve labeling van thiolgroepen mogelijk door de pH nauwkeurig aan te passen. Vervolgens kunnen onderzoekers, met behulp van massaspectrometrie met hoge resolutie, nauwkeurig plaatsen van thiolation identificeren, waardoor de belangrijke rol van deze post-translationele modificatie in vivo verder wordt opgehelderd.

Met behulp van HeLa-celmodellen werd eerst het hele proteoom geëxtraheerd. Vervolgens maakte modellering met NaHS en pH-aanpassing het mogelijk om thiolgroepen nauwkeurig te labelen met een universele cysteïnesonde. Via een reeks stappen, waaronder verrijking, enzymatische vertering en massaspectrometrische detectie, werden 180 peptiden die -SSH-modificaties bevatten geïdentificeerd, samen met 120 verwante eiwitten, waaronder de gerapporteerde thioleringsplaatsen GAPDH_C152 en C247.