Identificatie van eiwit-eiwitinteractie in levende cellen: nabijheidslabeling

Technisch platform

Het TurboID-technologieplatform omvat het fuseren van een gemuteerde biotineligase aan de C-terminus van een doeleiwit. In tot overexpressie gebrachte cellen biotinyleert de toevoeging van biotine snel interagerende eiwitten binnen 10 minuten, zelfs bij kamertemperatuur, met minimale achtergrondruis. Deze veelzijdigheid maakt TurboID geschikt voor een breed scala aan biologische systemen, waaronder zoogdiercellen, planten en insecten. Met biotine gemerkte eiwitten worden vervolgens geïsoleerd, verrijkt en verteerd om peptidemonsters te produceren voor massaspectrometrie, waardoor gedetailleerde analyse van eiwitinteracties en -functies mogelijk wordt.

Onze voordelen

01. Hoge katalytische efficiëntie

02. Beschadigt geen levende cellen

03. Hoge biotinyleringsefficiëntie en stabiliteit

04. Effectieve biotinylatie bij kamertemperatuur (25°C)

Onze service

Project	Identificatie van eiwit-eiwit-interactienetwerken in cellen
Steekproef	Cellysaat, levende cellen
Hardwareplatform	Contactloze ultrasone celvergruizer, ChemiDoc MP Imaging System, Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 massaspectrometer
Projectduur	4-6 weken
Leveringen	Projectrapport (inclusief experimentele procedures, data-analysegrafieken, bio-informatica-analyseresultaten)
Prijs	Klik om te raadplegen

Casestudy

Projectdoel:Analyseer veranderingen in het eiwitinteractoom van het doeleiwit (POI) in cellen voor en na medicamenteuze behandeling.
Oplossing:Gebruik een strategie voor nabijheidslabeling door een POI-TurboID-expressievector te construeren, deze in cellen tot overexpressie te brengen en met medicijnen behandelde en controlegroepen op te zetten voor biotinylatie. Verrijk het eiwitinteractoom in cellen, gevolgd door kwalitatieve en kwantitatieve analyse van verschillen in gebiotinyleerde eiwitten om veranderingen in het POI-interactoom te karakteriseren.
Datavisualisatie: