Achtergrondinformatie
Thermal Proteome Profiling (TPP) is een techniek die de stabiliteit van eiwitten beoordeelt door warmte toe te passen op levende cellen of lysaten en de resulterende veranderingen te analyseren met behulp van massaspectrometrie. Door te monitoren hoe eiwitten denatureren en neerslaan bij specifieke smelttemperaturen (Tm), helpt TPP te identificeren hoe medicijnen, liganden of omgevingsfactoren het proteoom beïnvloeden. Wanneer een medicijn of ligand aan een eiwit bindt, kan het de Tm veranderen, waardoor detectie van medicijn-doelwitinteracties mogelijk wordt. Deze aanpak wordt veel gebruikt bij het ontdekken van geneesmiddelen en proteomics om de stabiliteit, interacties en post-translationele modificaties van eiwitten te bestuderen.
Technisch platform
Onze voordelen
1. Het is niet nodig om de kleine doelmoleculen te wijzigen, veranderingen in de structuur-activiteitsrelaties te vermijden en het experimentele ontwerp te vereenvoudigen.
2. Van toepassing op zuivere eiwitten, lysaten (cellen of weefsels, enz.)
3. Weerspiegel directe interacties tussen eiwitten en kleine moleculen.
Casestudy
Doel van het project: Verifiëren of het kleine doelmolecuul via TPP rechtstreeks aan het doeleiwit in cellysaat is gebonden.
Oplossingen: Analyseer de thermische stabiliteit van het doeleiwit met behulp van Western blotting (Figuur 1), temperatuurbereik TPP-TR (Figuur 2) en verbindingsconcentratiebereik TPP-CCR (Figuur 3).
