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As esferas magnéticas revestidas com azida ChomiX®-Magbeads são projetadas anexando covalentemente um grupo bioortogonal de azida à superfície das esferas magnéticas.Através do grupo de ligação não clivável (Figura A) e do grupo de ligação clivável (Figura B), respectivamente, estas esferas podem ser aplicadas ao enriquecimento de macromoléculas modificadas com alcino, incluindo proteínas, ácidos nucleicos, anticorpos e açúcares.Sobre streptavidina (SA)cflutuantemmagnéticoborelhas,As esferas magnéticas revestidas com azida ChomiX®-Magbeads têm as seguintes vantagens:
1. Através da reação eficiente de "química de clique", as macromoléculas modificadas com alcino podem ser diretamente ligadas covalentemente às esferas magnéticas, ao contrário da interação não covalente e reversível entre estreptavidina e biotina.Portanto, o produto possui maior taxa de recuperação e melhor repetibilidade.
2. Como não há proteína na superfície das esferas magnéticas, a contaminação peptídica de fundo devido à digestão enzimática não será introduzida.Além disso, estas esferas reduzem a adsorção inespecífica para tornar as amostras mais limpas, ajudando a melhorar a eficiência de identificação de proteínas de baixa abundância.
3. Os grânulos magnéticos modificados molecularmente químicos são estáveis, tornando-os mais fáceis de transportar e armazenar.
4. As esferas magnéticas de azida cliváveis permitem a liberação suave (usando ácido fórmico) dos peptídeos modificados pela sonda química, o que é benéfico para a subsequente identificação por espectrometria de massa.
5. O produto é econômico e melhora a eficiência experimental, pois evita o tempo de enriquecimento com estreptavidina-biotina.
Gráfico A: Grânulo Magnético Revestido com Azida, grupo ligante não clivável
GráficoB: AzideConta Magnética Revestida, grupo clivável
Portanto, o desenvolvimento de esferas azido-magnéticas ChomiX®-Magbeads pode melhorar muito a eficiência de enriquecimento e separação de macromoléculas modificadas com alcino marcadas bioortogonalmente, simplificando assim o fluxo experimental.Em particular, a introdução de grupos ligantes cliváveis, que podem libertar eficientemente a proteína ou péptidos alvo, facilita a quantificação de proteínas ou a identificação de locais quimicamente modificados por sonda.Um estudo relacionado foi publicado no Journal of Proteome Research (J Proteome Res. 2023,3360-3367), um periódico confiável no campo da proteômica.As esferas têm concentração de 10 mg/ml e tamanho de partícula de 1,0 μm, com alta capacidade de carga de azida (30-50nmol/1mg) e excepcional hidrofilicidade.Além disso, possuem propriedades superparamagnéticas garantindo uma resposta magnética rápida.Sua excelente estabilidade de redispersão e estabilidade magnética garantem efetivamente alta taxa de ligação às proteínas, baixa adsorção inespecífica, uniformidade de reação e consistência de detecção.
Em 2023, o professor Wang Chu da Universidade de Pequim, cientista-chefe do ChomiX, publicou com seu grupo um esquema experimental de proteômica química eficiente e conciso no Journal of Proteome Research.Este esquema utiliza esferas magnéticas de azida cliváveis para reduzir significativamente o tempo de análise para o grupo de peptídeos de cisteína marcado com sonda química (figura 1).Além disso, a Figura 2 apresenta obviamente uma grande melhoria na taxa de identificação de péptidos modificados.Em comparação com as esferas magnéticas convencionais de estreptavidina, as esferas magnéticas de azida apresentam desempenho superior em termos de custo, tempo e eficiência, tornando-se uma ferramenta poderosa na pesquisa de proteínas, especialmente em proteômica química.
Figura 1: Combinado com esferas magnéticas revestidas com azida com grupo clivável, o tempo experimental do superTOP-ABPP pode ser reduzido para 9 horas
Figura 2: Quando combinados com esferas magnéticas revestidas com azida com grupo clivável, mais de 10.000 peptídeos de cisteína podem ser identificados nas mesmas condições
1. Antes do primeiro uso, agite totalmente no vórtice e misture bem para evitar alteração na concentração do cordão magnético.Evite ultrassons prolongados para evitar danos à superfície das esferas magnéticas.
2. A solução de armazenamento de esferas contém 20% de etanol.Antes de usar, realize separação magnética e lavagem 2 a 3 vezes com água pura ou solução tampão.Use as contas o mais rápido possível para evitar armazenamento prolongado;
3. Armazene a 4 ℃ e evite congelamento e descongelamento durante o uso.
4. Clivável Esferas magnéticas de azidadevebe mantido longe desubstâncias ácidas durante o armazenamento e uso.
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