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Esferas magnéticas revestidas com estreptavidina resistente à protease ChomiX®-Magbeads (prSA)
Gato.Não.：CMXR-000002
Nome do Produto：Esferas magnéticas revestidas com estreptavidina resistente a protease ChomiX®-Magbeads (prSA)
Introdução do produto
As esferas magnéticas revestidas com estreptavidina resistente à protease ChomiX®-Magbeads (prSA) são projetadas com estreptavidina quimicamente modificada, onde os resíduos de lisina e arginina são quimicamente selados.Esta modificação não afeta a ligação dos grânulos às proteínas biotiniladas, ao mesmo tempo que evita a degradação enzimática pelas proteases Tripsina e LysC.Em estudos proteômicos baseados em espectrometria de massa, as proteases Tripsina e LysC são frequentemente usadas para digestão de proteínas.Para evitar a perda de amostras, os pesquisadores realizam diretamente a digestão enzimática nas esferas em sistemas de esferas magnéticas de estreptavidina carregados com proteínas biotiniladas.
No entanto, este processo de digestão enzimática também gera uma grande quantidade de peptídeos derivados de estreptavidina, que interferem seriamente na detecção de peptídeos de baixa abundância na análise subsequente por espectrometria de massa.
Portanto, o desenvolvimento de esferas magnéticas revestidas com estreptavidina resistente à protease ChomiX®-Magbeads (prSA) pode reduzir bastante essa interferência, que é altamente adequada para digestão enzimática direta de proteínas biotiniladas carregadas em esferas magnéticas, e pode ser amplamente utilizada em proteômica química e experimentos de interação proteína-proteína em células como APEX e BioID.
As esferas possuem concentração de 10 mg/ml e tamanho de partícula de 1,0 μm, com alta capacidade de carga de estreptavidina (aproximadamente 50 μg/1mg) e hidrofilicidade extremamente alta.Suas propriedades superparamagnéticas garantem uma resposta magnética rápida.Eles também possuem excelente estabilidade de redispersão e estabilidade magnética, garantindo efetivamente alta taxa de ligação às proteínas, baixa adsorção inespecífica, uniformidade de reação e consistência de detecção.
Caso de Literatura
As esferas magnéticas são usadas para enriquecer e extrair proteínas biotiniladas do proteoma, seguidas de digestão direta nas esferas e identificação por espectrometria de massa de alta resolução.Em comparação com as esferas de estreptavidina convencionais (wtS), as amostras de esferas de estreptavidina resistentes à protease (prS) mostram uma quantidade quase imperceptível de péptidos derivados de estreptavidina nas amostras (Figura 1).
Quando aplicado em experimentos BioID para identificar proteínas que interagem com SEC61B em células HeLa, o prS pode identificar 362 proteínas, com uma intensidade geral de sinal proteico cerca de 10 vezes maior que a wtS (Figura 2).Os dados são provenientes da literatura (Molecular Systems Biology, 2020).
Figura 1: Cromatogramas de pico base dos peptídeos em amostras após enriquecimento de wtS (esquerda) ou prS (direita).
As intensidades correspondentes dos três peptídeos representativos (m/z = 603,3.655,3.1018,0) gerados a partir de estreptavidina digerida em esferas são mostradas no painel inferior (XIC).
Figura 2: Número e intensidade de proteínas que interagem com SEC61B identificadas por estreptavidina wtS e prS convencionais.
Observação
1. Antes do primeiro uso, agite totalmente no vórtice e misture bem para evitar alteração na concentração do cordão magnético.Evite ultrassons prolongados para evitar danos à superfície das esferas magnéticas.
2. A solução de armazenamento de esferas contém baixas concentrações de antimicrobiano de moléculas pequenas. Antes de usar, realize separação magnética e lavagem 2-3 vezes com água pura ou solução tampão.Use as contas o mais rápido possível para evitar armazenamento prolongado.
3. Armazene a 4 ℃ e evite congelamento e descongelamento durante o uso.
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