Plataforma Técnica
A quimioproteômica avançou na descoberta de alvos de medicamentos, especialmente com plataformas baseadas em sondas químicas. No entanto, desafios como síntese complexa, baixo rendimento, alto custo e SAR desconhecido de moléculas de medicamentos dificultam o progresso.
A plataforma de esferas magnéticas de fotoafinidade aborda esses problemas imobilizando moléculas ativas de medicamentos em esferas magnéticas funcionais por meio de iluminação UV, eliminando a necessidade de projeto de sonda química. Isso garante uma ligação específica entre o medicamento e sua proteína alvo. Após a incubação com o proteoma, as esferas enriquecem e isolam as proteínas alvo do medicamento, que são então analisadas por imunotransferência e espectrometria de massa.
Recursos da plataforma
Estudo de caso
Para validar os alvos da estaurosporina (Stau), nós a imobilizamos na superfície de esferas magnéticas funcionais modificadas por fotoafinidade (Stau-beads). Posteriormente, incubamos as contas Stau com todo o proteoma, usando contas Fmoc como grupo controle. Os resultados de Western blot (WB) resultantes são mostrados na figura abaixo, indicando que as esferas Stau enriqueceram efetivamente a proteína alvo FECH (um alvo positivo conhecido).
Em seguida, submetemos as proteínas enriquecidas e separadas usando contas Fmoc e contas Stau à digestão enzimática e análise por espectrometria de massa. Comparamos quantitativamente as diferenças de intensidade das proteínas entre o grupo experimental (esferas Stau) e o grupo controle (esferas Fmoc). Os resultados demonstraram que todas as proteínas alvo positivas conhecidas foram significativamente enriquecidas no grupo Stau-beads, confirmando a eficácia do método.
