Техническая платформа
Хемопротеомика продвинула вперед обнаружение мишеней для лекарств, особенно с помощью платформ на основе химических зондов. Однако прогрессу препятствуют такие проблемы, как сложный синтез, низкий выход, высокая стоимость и неизвестный SAR молекул лекарств.
Платформа фотоаффинных магнитных шариков решает эти проблемы, иммобилизуя активные молекулы лекарственного средства на функциональных магнитных шариках посредством УФ-освещения, устраняя необходимость в разработке химических зондов. Это обеспечивает специфическое связывание препарата с белком-мишенью. После инкубации с протеомом гранулы обогащают и изолируют целевые белки лекарственного средства, которые затем анализируются с помощью иммуноблоттинга и масс-спектрометрии.
Возможности платформы
Тематическое исследование
Чтобы подтвердить мишень стауроспорина (Stau), мы иммобилизовали его на поверхности модифицированных фотоаффинностью функциональных магнитных шариков (Stau-бусины). Впоследствии мы инкубировали бусины Stau со всем протеомом, используя Fmoc-бусины в качестве контрольной группы. Полученные результаты вестерн-блоттинга (WB) показаны на рисунке ниже, что указывает на то, что шарики Stau эффективно обогащают целевой белок FECH (известная положительная мишень).
Затем мы подвергли белки, обогащенные и разделенные с использованием Fmoc-бусинок и Stau-бусинок, ферментативному расщеплению и масс-спектрометрическому анализу. Мы количественно сравнили различия в интенсивности белков между экспериментальной группой (Stau-бусины) и контрольной группой (Fmoc-бусины). Результаты показали, что все известные положительные целевые белки были значительно обогащены группой Stau-бусинок, что подтверждает эффективность метода.
