Продукты
Идентификация сетей белок-белкового взаимодействия в клетках
Белково-белковые взаимодействия (PPI) представляют собой незаменимый основной компонент клеточной жизнедеятельности, охватывающий множество временных и пространственных измерений и глубоко влияющий на важнейшие клеточные процессы, такие как регуляция клеточного цикла, синтез и секреция белка, передача сигналов и метаболизм. Таким образом, глубокое исследование белковых взаимодействий играет ключевую роль в раскрытии тайн молекулярных регуляторных сетей.
В настоящее время широко используемые методы изучения белковых взаимодействий включают коиммунопреципитацию, анализы с понижением уровня, белковые микрочипы и другие. Однако эти методы сталкиваются с многочисленными проблемами при практическом применении, такими как чрезмерная зависимость от антител и трудности с эффективным улавливанием временных или слабых взаимодействий. Для решения этих проблем возникла технология бесконтактной маркировки, при которой ферменты биотинилируют целевые белки в непосредственной близости с последующей аффинной очисткой и масс-спектрометрической характеристикой ИПП. Среди них для идентификации ИПП наиболее широко используются методы бесконтактной маркировки на основе аскорбатпероксидазы (APEX) и биотинлигазы. TurboID, новая технологическая платформа, разработанная на основе бесконтактной идентификации биотина (BioID), использует мутированную форму биотинлигазы E. coli. Платформа технологии бесконтактной маркировки CoLinkBio на основе масс-спектрометрии включает в себя различные методы, включая BioID, APEX, TurboID и другие. Эти методы демонстрируют выдающуюся применимость в системах живых клеток, особенно при регистрации временных или динамических событий взаимодействия белков, а также взаимодействий с участием белков с низким содержанием или гидрофобных мембранных белков.
Техническая платформа
Если взять в качестве примера технологическую платформу TurboID, эта платформа соединяет мутированную биотинлигазу с С-концом целевого белка. В клетках со сверхэкспрессией добавление стимула биотина обеспечивает быстрое биотинилирование взаимодействующих белков целевого белка в течение 10 минут. Этот процесс маркировки не только быстрый и малофоновый, но и может осуществляться плавно даже при комнатной температуре. Следовательно, технологическая платформа TurboID значительно расширяет возможности ее применения, будучи подходящей не только для клеточных систем млекопитающих, но и для различных биологических систем, таких как растения и насекомые. Впоследствии, путем выделения и обогащения меченных биотином белков с последующим ферментативным расщеплением, можно легко получить образцы пептидов для масс-спектрометрического анализа, что позволяет углубленно исследовать взаимодействия белков и их функции.
Наши преимущества
1. Профессиональное мастерство: наша команда может похвастаться обширным опытом и публикациями в ведущих журналах, предлагая ведущие в отрасли технические услуги.
2. Эффективные решения. Мы используем надежные методы для быстрого продвижения проектов, предоставляя беспроблемные решения.
3. Строгий контроль качества. Наша зрелая система управления качеством, соответствующая стандартам ISO 9001, обеспечивает подлинность и надежность наших отчетов.
4. Систематическое управление проектом: от консультации до предоставления отчета, мы предоставляем своевременную информацию о ходе работ, обеспечивая удовлетворенность клиентов и эффективное выполнение проекта.
5. Новейшее оборудование. Оснащенные современными масс-спектрометрами, такими как Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 и Bruker timsTOF, мы проводим новаторские исследования.
Наш сервис
| Проект | Идентификация сетей белок-белкового взаимодействия в клетках |
| Образец | Клеточные лизаты, живые клетки |
| Аппаратная платформа | Бесконтактный ультразвуковой измельчитель клеток, система визуализации ChemiDoc MP, масс-спектрометр Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 |
| Продолжительность проекта | 4-6 недель |
| Результаты | Отчет о проекте (включая экспериментальные процедуры, диаграммы анализа данных, результаты биоинформатического анализа) |
| Цена | Нажмите, чтобы проконсультироваться |
Тематическое исследование
Цель проекта:Анализировать изменения в белковом интерактоме белка-мишени (POI) в клетках до и после лечения препаратом.
Решение:Используйте стратегию бесконтактной маркировки, создав вектор экспрессии POI-TurboID, сверхэкспрессируя его в клетках и создав обработанные лекарственными средствами и контрольные группы для биотинилирования. Обогатите интерактом белка в клетках с последующим качественным и количественным анализом различий в биотинилированных белках для характеристики изменений в интерактоме POI.
Визуализация данных:
