ChomiX-Magbeads Proteasresistenta Streptavidin (prSA) belagda magnetiska pärlor

ChomiX®-Magbeads Proteasresistent Streptavidin (prSA) belagda magnetiska pärlor

Katt.Nej.：CMXR-000002

produktnamn： ChomiX®-Magbeads Proteasresistent Streptavidin (prSA) belagda magnetiska pärlor

produkt introduktion

ChomiX®-Magbeads Proteasresistent Streptavidin (prSA) belagda magnetiska pärlor är designade med kemiskt modifierat streptavidin, där lysin- och argininrester är kemiskt förseglade.Denna modifiering påverkar inte pärlor som binder till biotinylerade proteiner samtidigt som den förhindrar enzymatisk nedbrytning av trypsin- och LysC-proteaser.I masspektrometribaserade proteomikstudier används ofta trypsin- och LysC-proteaser för proteinnedbrytning.För att undvika provförlust utför forskare direkt enzymatisk nedbrytning på pärlan i magnetiska pärlsystem med streptavidin laddade med biotinylerade proteiner.

Emellertid genererar denna enzymatiska digestionsprocess också en stor mängd streptavidin-härledda peptider, som allvarligt stör detekteringen av peptider med låg förekomst i efterföljande masspektrometrianalys.

Därför kan utvecklingen av ChomiX®-Magbeads Protease-resistant Streptavidin (prSA) Coated Magnetic Beads avsevärt minska denna interferens, som är mycket lämplig för direkt enzymatisk nedbrytning av biotinylerade proteiner laddade på magnetiska pärlor, och kan användas i stor utsträckning inom kemisk proteomik och protein-protein interaktionsexperiment i celler som APEX och BioID.

Pärlorna har en koncentration på 10 mg/ml och en partikelstorlek på 1,0 μm, med hög streptavidinladdningskapacitet (cirka 50 μg/1mg) och extremt hög hydrofilicitet.Deras superparamagnetiska egenskaper garanterar snabb magnetisk respons.De har också utmärkt redispersionsstabilitet och magnetisk stabilitet, vilket effektivt säkerställer hög proteinbindningshastighet, låg ospecifik adsorption, reaktionslikformighet och detektionskonsistens.

Litteraturfall

De magnetiska pärlorna används för att berika och extrahera biotinylerade proteiner från proteomet, följt av direkt nedbrytning på pärlan och identifiering med högupplöst masspektrometri.Jämfört med de konventionella streptavidinpärlorna (wtS) visar de proteasresistenta streptavidinpärlorna (prS) proverna en knappt detekterbar mängd streptavidinhärledda peptider i proverna (Figur 1).

När den tillämpas i BioID-experiment för att identifiera SEC61B-interagerande proteiner i HeLa-celler, kan prS identifiera 362 proteiner, med en total proteinsignalintensitet cirka 10 gånger högre än wtS (Figur 2).Uppgifterna är hämtade från litteraturen (Molecular Systems Biology, 2020).

_cgi-bin_mmwebwx-bin_webwxgetmsgimg__&MsgID=5975855783773314984&skey=@crypt_f8f7338c_c7041bda8f36ff4ded0d27c585996b1f&mmx_webappfile

Figur 1: Bastoppkromatogram av peptiderna i prover efter anrikning av wtS (vänster) eller prS (höger).

Motsvarande intensiteter för de tre representativa peptiderna (m/z = 603,3,655,3,1018,0) genererade från på pärlor digererad streptavidin visas i den nedre panelen (XIC).

_cgi-bin_mmwebwx-bin_webwxgetmsgimg__&MsgID=7303143611616562577&skey=@crypt_f8f7338c_c7041bda8f36ff4ded0d27c585996b1f&mmx_webappfile

Figur 2: Antal och intensitet av SEC61B-interagerande proteiner identifierade av konventionella streptavidin wtS och prS.

Notera

1. Före den första användningen, vortexa och blanda väl för att förhindra att koncentrationen av magnetiska pärlor ändras.Undvik långvarigt ultraljud för att förhindra skador på ytan av magnetiska pärlor.

2. Pärlförvaringslösningen innehåller låga koncentrationer av småmolekylära antimikrobiellt medel. Utför magnetisk separation och tvätt 2-3 gånger med rent vatten eller buffertlösning före användning.Använd pärlorna så snart som möjligt för att undvika lång lagring.

3. Förvara vid 4 ℃ och undvik frysning-upptining under användning.