Bakgrundsinformation
Thermal Proteome Profiling (TPP) är en teknik som bedömer proteinstabilitet genom att applicera värme på levande celler eller lysat och analysera de resulterande förändringarna med masspektrometri. Genom att övervaka hur proteiner denaturerar och fälls ut vid specifika smälttemperaturer (Tm), hjälper TPP att identifiera hur läkemedel, ligander eller miljöfaktorer påverkar proteomet. När ett läkemedel eller ligand binder till ett protein kan det ändra Tm, vilket möjliggör detektering av läkemedel-målinteraktioner. Detta tillvägagångssätt används i stor utsträckning inom läkemedelsupptäckt och proteomik för att studera proteinstabilitet, interaktioner och posttranslationella modifieringar.
Teknisk plattform
Våra fördelar
1. Inget behov av att modifiera de små målmolekylerna, undvika förändringar i struktur-aktivitetsförhållanden och förenkla experimentell design.
2. Tillämplig på rena proteiner, Iysater (celler eller vävnader, etc.)
3. Reflektera direkta interaktioner mellan proteiner och små molekyler.
Fallstudie
Projektmål: Verifiera om den lilla målmolekylen är direkt bunden till målproteinet i cellysat genom TPP.
Lösningar: Analysera den termiska stabiliteten för målproteinet med hjälp av Western blotting (Figur 1), temperaturintervall TPP-TR (Figur 2) och föreningskoncentrationsområde TPP-CCR (Figur 3).
