Texnik platforma
Chemoproteomika, ayniqsa, kimyoviy zondga asoslangan platformalar bilan, dori maqsadini ilg'or kashf etdi. Biroq, murakkab sintez, past rentabellik, yuqori narx va dori molekulalarining noma'lum SAR kabi muammolar taraqqiyotga to'sqinlik qiladi.
Fotoaffinitli magnit boncuk platformasi ushbu muammolarni faol dori molekulalarini UV yorug'lik orqali funktsional magnit boncuklarga immobilizatsiya qilish orqali hal qiladi va kimyoviy prob dizayniga ehtiyojni yo'q qiladi. Bu preparat va uning maqsadli oqsili o'rtasida o'ziga xos bog'lanishni ta'minlaydi. Proteom bilan inkubatsiya qilingandan so'ng, boncuklar dori maqsadli oqsillarini boyitadi va ajratadi, keyinchalik ular immunoblotting va massa spektrometriyasi orqali tahlil qilinadi.
Platformaning xususiyatlari
Case Study
Staurosporin (Stau) maqsadlarini tasdiqlash uchun biz uni fotoaffinity o'zgartirilgan funktsional magnit boncuklar (Stau-boncuklar) yuzasiga immobilizatsiya qildik. Keyinchalik, biz Fmoc-boncuklarni nazorat guruhi sifatida ishlatib, Stau-boncuklarni butun proteom bilan inkubatsiya qildik. Olingan Western blot (WB) natijalari quyidagi rasmda ko'rsatilgan, bu Stau-munchoqlar maqsadli protein FECH (ma'lum ijobiy maqsad) ni samarali boyitganligini ko'rsatadi.
Keyinchalik, Fmoc-boncuklar va Stau-boncuklar yordamida boyitilgan va ajratilgan oqsillarni fermentativ hazm qilish va massa spektrometriyasi tahliliga o'tkazdik. Eksperimental guruh (Stau-boncuklar) va nazorat guruhi (Fmoc-boncuklar) o'rtasidagi oqsillarning intensivlik farqlarini miqdoriy jihatdan taqqosladik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, barcha ma'lum ijobiy maqsadli oqsillar Stau-beads guruhida sezilarli darajada boyitilgan, bu usulning samaradorligini tasdiqlaydi.
