Hujayralarda oqsil-oqsil o'zaro ta'sir tarmoqlarini aniqlash

Protein-oqsil o'zaro ta'siri (PPI) ko'plab vaqtinchalik va fazoviy o'lchamlarni qamrab oluvchi va hujayra siklini tartibga solish, oqsil sintezi va sekretsiyasi, signal uzatish va metabolizm kabi muhim hujayra jarayonlariga chuqur ta'sir ko'rsatadigan hujayra hayoti faoliyatining ajralmas asosiy komponentini tashkil qiladi. Shuning uchun oqsil o'zaro ta'sirini chuqur o'rganish molekulyar tartibga soluvchi tarmoqlar sirlarini ochishda hal qiluvchi rol o'ynaydi.

Hozirgi vaqtda oqsillarning o'zaro ta'sirini o'rganish uchun ko'p qo'llaniladigan usullarga koimmunoprecipitatsiya, pastga tushirish tahlillari, oqsil mikroarraylari va boshqalar kiradi. Biroq, bu usullar amaliy qo'llashda ko'plab muammolarga duch keladi, masalan, antikorlarga haddan tashqari qaramlik va vaqtinchalik yoki zaif o'zaro ta'sirlarni samarali qo'lga kiritishda qiyinchiliklar. Ushbu muammolarni hal qilish uchun yaqinlikni belgilash texnologiyasi paydo bo'ldi, bu orqali fermentlar maqsadli oqsillarni yaqin masofada biotinillaydi, so'ngra PPIlarning yaqinligini tozalash va massa spektrometriyasi xarakteristikasi amalga oshiriladi. Ular orasida askorbat peroksidaza (APEX) va biotin ligazaga asoslangan yaqinlik belgilarini aniqlash usullari PPI identifikatsiyasi uchun eng keng tarqalgan hisoblanadi. TurboID, yaqinlikka bog'liq biotin identifikatsiyasi (BioID) asosida ishlab chiqilgan yangi texnologiya platformasida E. coli biotin ligazasining mutatsiyaga uchragan shakli qo'llaniladi. CoLinkBio-ning mass-spektrometriyaga asoslangan yaqinlik yorlig'i texnologiyasi platformasi BioID, APEX, TurboID va boshqalarni o'z ichiga olgan turli texnikalarni o'z ichiga oladi. Ushbu usullar jonli hujayra tizimlarida, xususan, vaqtinchalik yoki dinamik oqsil o'zaro ta'siri hodisalarini, shuningdek, kam miqdorda oqsillar yoki hidrofobik membran oqsillarini o'z ichiga olgan o'zaro ta'sirlarni olishda ajoyib qo'llanilishini namoyish etadi.

Texnik platforma

TurboID texnologiya platformasini misol qilib olsak, ushbu platforma mutatsiyaga uchragan biotin ligazani maqsadli oqsilning C-terminusiga birlashtiradi. Haddan tashqari ekspressiv hujayralarda biotin stimulyatorining qo'shilishi maqsadli oqsilning o'zaro ta'sir qiluvchi oqsillarini 10 minut ichida tez biotinillash imkonini beradi. Ushbu etiketkalash jarayoni nafaqat tez va past fonda, balki xona haroratida ham muammosiz amalga oshirilishi mumkin. Binobarin, TurboID texnologiya platformasi nafaqat sutemizuvchilar hujayra tizimlari, balki o'simliklar va hasharotlar kabi turli biologik tizimlar uchun ham mos bo'lgan holda o'zining qo'llanilishini sezilarli darajada kengaytiradi. Keyinchalik, biotin bilan belgilangan oqsillarni ajratish va boyitish, so'ngra fermentativ hazm qilish yo'li bilan peptid namunalarini massa spektrometriyasi tahlili uchun osongina olish mumkin, bu oqsillarning o'zaro ta'sirini va ularning funktsiyalarini chuqur o'rganishga imkon beradi.

Bizning afzalliklarimiz

1. Professional mukammallik: Bizning jamoamiz sanoatning yetakchi texnik xizmatlarini taklif etuvchi yirik jurnallarda katta tajriba va nashrlarga ega.
2. Samarali yechimlar: Biz loyihalarni tez olg'a siljitish uchun ishonchli usullarni qo'llaymiz va muammosiz yechimlarni taqdim etamiz.
3. Qattiq sifat menejmenti: ISO 9001 standartlariga rioya qilgan holda, bizning etuk sifat menejmenti tizimimiz hisobotlarimizning haqiqiyligi va ishonchliligini ta'minlaydi.
4. Tizimli loyihalarni boshqarish: Maslahatlashuvdan hisobotni yetkazib berishgacha, biz mijozlar ehtiyojini qondirish va loyihaning samarali bajarilishini ta'minlab, o'z vaqtida yangilanishlarni ta'minlaymiz.
5. Eng zamonaviy uskunalar: Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 va Bruker timsTOF kabi ilg'or massa spektrometrlari bilan jihozlangan holda biz innovatsion tadqiqotlarni osonlashtiramiz.

Bizning xizmatimiz

Loyiha	Hujayralarda oqsil-oqsil o'zaro ta'sir tarmoqlarini aniqlash
Namuna	Hujayra lizati, tirik hujayralar
Uskuna platformasi	Kontaktsiz ultratovushli hujayra pulverizatori，ChemiDoc MP tasvirlash tizimi，Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 massa spektrometri
Loyiha muddati	4-6 hafta
Etkazib beriladigan narsalar	Loyiha hisoboti (shu jumladan eksperimental protseduralar, ma'lumotlarni tahlil qilish jadvallari, bioinformatika tahlili natijalari)
Narxi	Maslahat olish uchun bosing

Case Study

Loyiha maqsadi:Dori bilan davolashdan oldin va keyin hujayralardagi maqsadli oqsilning (POI) oqsil interaktomidagi o'zgarishlarni tahlil qiling.
Yechim:POI-TurboID ifoda vektorini yaratish, uni hujayralarda haddan tashqari ifodalash va biotinilatsiya uchun dori-darmon bilan ishlov berilgan va nazorat guruhlarini o'rnatish orqali yaqinlik belgilarini belgilash strategiyasidan foydalaning. POI interaktomidagi o'zgarishlarni tavsiflash uchun hujayralardagi oqsil interaktomini boyiting, so'ngra biotinlangan oqsillardagi farqlarni sifat va miqdoriy tahlil qiling.
Ma'lumotlarni vizualizatsiya qilish: